Validación de una técnica de detección para Listeria monocytogenes en leche, embutidos y queso mediante la implementación de PCR punto final basado en los pares de iniciadores LM8, LM13 y LM20

Abstract

Listeria es un género que se puede ubicar en muchos sitios como suelo, agua no tratada, superficies, etc. En este género sobresale Listeria monocytogenes como un patógeno de transmisión alimentaria de importancia en la industria que afecta principalmente a pacientes inmunosuprimidos. Su detección resulta fundamental en la industria de alimentos y las técnicas tradicionales requieren de varios días para su consecución,por esta razón ha ido cobrando relevancia el desarrollo de metodologías que permiten tener resultados en menos tiempo como las técnicas basadas en biología molecular que utilizan la detección de ácidos nucleicos del patógeno. A partir de tres pares de iniciadores, Lm8, Lm13 y Lm20, descritos por Tao y colaboradores (2015) se realizaron pruebas para evaluar la eficiencia de estos en la detección de Listeria monocytogenes en queso, embutido y leche luego de incubarse en caldo BLEB. Se realizaron pruebas que confirmaron como los tres iniciadores amplificaron el ADN de Listeria monocytogenes, siendo Lm20 el más específico al generar más productos detectables en el análisis electroforético luego de 24 horas de incubación en enriquecimiento selectivo. A partir de estos resultados se propuso una técnica mediante la cual se utiliza un PCR luego de ese tiempo y se valida. En este procedimiento se observan resultados distintos esperados: con una especificidad de 60% para la leche, 70% para salchicha y 10% para queso; sensibilidad de 90% para leche, 80% para salchicha y 100% para queso. La exactitud relativa de la matriz leche y de salchicha fue de 75 mientras que la de queso fue de 55 y un índice de concordancia de Kappan de 0,6 para leche y salchicha y 0,4 para queso. Esto puede explicarse por la competencia de L.monocytogenes con los otros microorganismos agregados en la validación, generando un crecimiento poblacional menor al cultivo puro en su condición inicial, en combinación con la interferencia de ciertos componentes en las matrices y medios de cultivo que inhibieron a la enzima Taq- polimerasa. En la validación, la matriz con mejores resultados fue la leche y el queso presentó mayores discrepancias. Se hace una prueba de recuperación de Listeria monocytogenes (inoculada como cultivo puro) a lo largo de 12 días. En este ensayo se observó que los mejores resultados se obtuvieron en la matriz leche y por otro lado, la matriz queso presentó problemas para la recuperación en el tiempo. Se concluyó que hay matrices alimentarias complejas con problemas para implementar técnicas de biología molecular para la detección de patógenos.