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Ítem Regulación de genes implicados en la virulencia de Brucella abortus mediante el sistema de transducción de señales de dos componentes BVRR/BVRS(2023-12-13) Rivas Solano, Olga Lilliana; Guzmán Verri, CaterinaB. abortus es un patógeno zoonótico intracelular-extracelular facultativo. Su virulencia se relaciona con su capacidad para invadir y replicarse dentro de células hospederas. Estudios previos con mutantes por transposición en los genes bvrR y bvrS que constituyen el sistema de dos componentes BvrR/BvrS, han demostrado que estas cepas son atenuadas y que BvrR/BvrS regula más de 100 genes relevantes para la virulencia. Sin embargo, no se han reportado mutantes por deleción para comparar fenotipos, y confirmar que la atenuación observada se debe directamente a la ausencia de BvrR/BvrS. No se conoce si BvrR/BvrS regula todos esos genes de forma directa, pues algunos de ellos codifican factores de transcripción. Entre los pocos genes cuya expresión se ha demostrado que está regulada positivamente por BvrR/BvrS, destacan: omp25, que codifica para una proteína de membrana externa conservada en Brucella con funciones estructurales e inmunomoduladoras; y el circuito de virulencia BvrR-VjbR-VirB, que es necesario para el tránsito intracelular, la replicación bacteriana, la salida de la célula hospedera y la infección de nuevas células. Además, en Brucella, pocas regiones promotoras han sido estudiadas. En esta tesis, construimos una cepa mutante de B. abortus con una doble deleción en bvrR/bvrS y demostramos que presenta un fenotipo atenuado similar al de las mutantes por transposición, lo que contribuye a validar el papel de BvrR/BvrS en la virulencia. También demostramos bvrR y bvrS pertenecen a un operón de 16 genes cuya organización transcripcional se encuentra conservada solo en miembros del orden Rhizobiales capaces de transitar entre ambientes extra e intracelulares, lo que respalda la importancia de este operón para la virulencia. Además, estudiamos el regulón de BvrR en condiciones que simulan el ambiente intracelular e identificamos regiones genómicas que se pueden unir a BvrR y que están asociadas a genes diana posiblemente regulados de forma directa por BvrR y con funciones relevantes para la virulencia. Confirmamos unión directa de BvrR corriente arriba los siguientes genes relacionados con la virulencia: omp25, tamA, pckA y bvrR, lo que implica autoregulación del operón bvrR/bvrS. Reportamos un sitio de unión a BvrR en el promotor del operón virB, el cual también es regulado por otros factores de transcripción adicionales. Contrario a lo reportado en Sinorhizobium meliloti con ortólogos de BvrR y del regulador transcripcional TetR2, no encontramos interacción directa entre BvrR y tetR2, el cual regula la expresión de vjbR en B. abortus en conjunto con otros factores de transcripción, incluyendo BvrR, lo que podría indicar un evento evolutivo relacionado con virulencia, pues S. meliloti es un endosimbionte. Además, caracterizamos la región reguladora de omp25 como prototipo de región regulada por BvrR y encontramos que presenta tres sitios de unión a BvrR y dos sitios de inicio de la transcripción, lo que sugiere una regulación diferencial en respuesta a condiciones ambientales. En conclusión, nuestros resultados contribuyen a comprender mejor la regulación génica de la virulencia a través de BvrR/BvrS en B. abortus.Ítem Software para la evaluación de destrezas metacognitivas en el aprendizaje de la programación(2023) Gang Vincenzi, Ricardo; Molina Delgado, MauricioAl momento de programar las acciones de los estudiantes, estas están guiadas principalmente, por su valoración del avance hacia la solución. En esta investigación educativa se propone una manera de explorar la relación entre destrezas metacognitivas y acciones al aprender a programar. Se capturan las acciones del principiante al momento mismo de la programación para su posterior análisis, en aras de realizar una medición de destrezas metacognitivas de regulación, organización y planificación de las subtareas que se realizan en la solución programada de un problema. Se estudia la relación entre las acciones y destrezas metacognitivas con análisis de grupos de estudiantes y la caracterización de estos por destrezas. Se propone la utilización de un sistema experto difuso, cuyas reglas de producción representen las relaciones entre acciones y destrezas metacognitivas, que puede refinarse con aplicaciones adicionales del software, en más contextos y con más estudiantes.