Tamizaje de deleciones en pacientes con distrofia 
muscular de Duchenne (DMD) o Becker-Kiener (BMD) 
mediante PCR Multiplex en Costa Rica, 1998-2000. 
Vanessa M. Sancho (*), Manuel Saborlo (**), Carlos de Cespedes (*"), Jorge Azofelfa("") 
(*) BiOloga, genetista, Escuela de Biologia, Universidad de Costa Rica. Institute de Investigaciones en Salud (INISA). 
(") Pediatra, Especialista en Genetica Servicio de Genetica y Metabolism°, Hospital Nacional de Nirios Medico. 
Bioquimico, Escuela de Medicine, UCR 
("") BiOlogo, genetista. Dr. Institute de Investigaciones en Salud (INISA) 
© Acta Pediatrica Costarricense 2001, volumen 15, numero 2. 
Objetivo: Iniciar los estudios genetic° 
moleculares sabre las distrofinopatias en 
Costa Rica. 
Materiales y Metodos: Treinta y un pacientes 
varones, diagnosticados con distrofia 
muscular, que podrian ser distrofinopaticos 
fueron reevaluados clinicamente. Veintitres 
mostraron un fenotipo de DMD y dos de BMD. 
Seis no mostraron sintomas definitivos de 
distrofinopatias. ADN de los pacientes fue 
analizado mediante PCR-multiplex en 
bUsqueda de deleciones en el gen de la 
distrofina. Tambien se realize) un diagnostic° 
prenatal a una portadora obligada. 
Resultados: Diez pacientes presentaron 
deleciones: en uno abarca 23 exones (del 23 a! 
25), en dos ocho exones (del 45 al 52 y del 12 
al 19), en otro siete exones (del 60 al 66), en 
dos seis exones (del 45 al 50); en cuatro 
pacientes Ia deletion comprende un Calico 
exon: el 52 en dos de etlos, el 19 y el 44. Los 
seis pacientes con diagnostic° dudoso no 
mostraron deleciones. Un hijo de Ia portadora 
obligada, afectado con DMD tiene una 
deletion de 37 exones (del 6 al 42), mientras 
que el feto no la tiene. 
Conclusion: El traslape de sintomas entre las 
distintas distrofias musculares, la falta de 
pruebas diagneisticas de Iaboratorio y de 
especialistas en el diagneistico diferencial 
evidencian la necesidad de implementar 
metodos diagnosticos mas discriminantes en 
Costa Rica. La identificacion de pacientes con 
deleciones permite buscar estas mutaciones 
en las mujeres con posible riesgo de ser 
portadoras y que asi reciban mejor consejo 
genetico. 
Palabras clave: distrofia muscular; Duchenne, 
Becker-Kiener, herencia ligada al cromosoma  
X, 	 diagnostic° 	 molecular, 	 distrofina, 
distrofinopatia, deletion, PCR-multiplex. 
El termino distrofia muscular progresiva, 
introducido por Erb en 1891(1), refiere a un 
subgrupo heterogeneo de las miopatias 
hereditarias, caracterizado por la destruction de 
la arquitectura tisular con proliferacion de 
mesenquima (2). Las formas mas comunes son 
las distrofinopatias: la distrofia muscular de 
Duchenne (DMD) y Ia distrofia muscular de 
Becker-Kiener (BMD), ambas enfermedades 
alelicas, esto es, producidas por mutaciones en el 
misrno gen, el de la distrofina, En conjunto, ellas 
compfenden mas del 40% del total de las 
distrofias musculares (3). Su herencia es 
recesva, llgada al cromosoma X, por lo que los 
afectados son fundamentalmente varones (1), 
aunque un 8% de las mujeres portadoras de DMD 
presentan manifestaciones clinicas en diversos 
grades (4). 
La forma mas severe y frecuente es la 
DMD. padecimiento caracterizado en 1855 por el 
neurologo frances Duchenne de Boulogne (1). Su 
incidencia se estima en 1:3 500 recien nacidos 
varones (3). En un tercio de los casos no hay 
antecedentes familiares, lo que sugiere que ellos 
podrian deberse a mutaciones "de novo" (5,6) 
reflejandose as) una alta inestabilidad del gen. 
Aunque hay evidencia de que Ia miopatia ya esta 
presente en el feto, los sintomas se manifiestan 
entre los 3 y los 5 afios como retardo en el,  
desarrollo motor, un caminar de puntillas, 
seudohipertrofia de los gemelos y maniobra de 
Gowers (1). La capacidad ambulatoria se pierde 
alrededor de los 12 arias y la muerte sobreviene 
hacia el final de la segunda decade de vide (1). 
En 1955 Becker y Kiener (7) 
descnbieron, en miembros de Ia propia familia de 
Kiener, la forma mas benigna y de progresiOn 
mss lenta, que hay Ileva su nombre. La incidencia 
de Ia BMD se ha estimado en 1: 18 500 red& 
nacidos varones (3). 
En 1982 se demostro que el locus se 
ubica en el brazo corto del cromosoma X ( Xp21) 
(8) y en 1985 se identified) el gen (9), lo que 
permitio comprobar que la DMD y la BMD son 
desordenes alelicos. El gen abarca unas 2.4 
megabases (2.4 millones de pares de bases) y 
consta de al menos 79 exones o regiones 
codificantes (10, 11). Su producto es la distrofina, 
una proteina de 427 kDa, localizada en la cara 
interne del sarcolema (12, 13). El gen expresa 
isoformas particulares en musculo esqueletico, 
liso, cardiaco y en tejido nervioso (12, 13, 14), lo 
cual indica que puede cumplir varias funciones 
(15, 16). Estes isoformas se producen por la 
expresion controlada diferencialmente de al 
menos 7 promotores especificos de cada tejido y 
par eventos de ediciOn postranscripcional del 
ARN mensajero (2, 12,13). Asociado a esto, se 
ha contemplado recientemente la posibilidad de 
que una mutation en el promotor de Ia isoforma 
cadiaca sea responsable de una cardiomiopatia 
aislada (17) 
Las pruebas diagnosticas muestran 
biopsies de mesculo anormales tanto en la DMD 
coma en la BMD, asi como electromiografias 
alteradas y valores elevadas, hasta den veces 
sobre lo normal, de creatina quinasa serica (SCK) 
(1, 2). Los pacientes con DMD tienen niveles 
virtualmente indetectables de distrofina, mientras 
que en aquellos con BMD la proteina se 
encuentra alterada en tamario y cantidad, aunque 
esto no es discriminatorio entre DMD y BMD, ya 
que se han observed° pacientes con niveles 
sumamente reducidos de distrofina que tienen un 
fenotipo de BMD (2). 
Pruebas a nivel de ADN permiten 
complementar el diagnostico clinic°. Lino de los 
metodos, Ia reaction en cadena de la polimerasa 
(PCR) (32) se implemento pare Ia DMD y la BMD 
en 1988 par Chamberlain y colaboradores (33) 
coma PCR multiplex, una variante de la tecnica 
que permite amplificar simultaneamente, 
empleando una combined& de 18 imprimadores 
(primers), segmentos de 9 exones del gen de la 
distrofina en una anica reaction (33, 34). Si 
alguna de las secuencias codificantes este 
deletada en el gen del paciente, no se obtiene 
producto de amplification. Beggs et al. (35) 
complementaron el protocolo anterior con una 
combinaciOn de 9 exones adicionales; de esta 
manera con solo dos reacciones se pueden 
detectar al menos el 98% de las deleciones 
responsables de estas enfermedades. 
En Costa Rica el diagnOstico clinico de 
!as distrofias musculares rara vez sugiere el tipo 
diagnosticado, y solo en una minoria de los casos 
se cuenta con datos sabre niveles de SCK y 
electromiograffa. Sumado a esto, la falta de 
documented& sobre la historia familiar, a si esta 
es negative, dificulta aan mss el diagnOstico 
correcto. Par lo tanto, las condiciones no han sido 
propicias pare realizar estudios sabre las 
distrofias musculares en general. A continued& 
se presenta un estudio de reevaluation clinica y 
diagnOstico molecular de distrofinopatias en 
Costa Rica. Se encontraron deleciones en el gen 
de la distrofina, que podrian ser responsables del 
padecimiento en algunos pacientes y, por lo 
tante, parecen confirmar el diagnOstico clinico. 
Asi se ha podido identificar a varias mujeres 
como posibles portadoras de estas mutaciones, 
lo que puede incrementar el nivel de certeza pare 
ofrecerles el consejo genetico. 
MATERIALES Y METODOS 
Estudios en varios paises han mostrado 
que entre el 60 y el 65% de los casos de DMD y 
BMD se deben a deleciones (18, 19, 20). Aunque 
se han descrito diferentes proporciones en 
algunos paises (21, 22), no hay estudios 
concluyentes sabre si el patron de deleciones a lo 
largo del gen varia con la etnia a la nacionalidad 
(23). Del 5 al 10% de los casos, con un 
sobresaliente 14% en Japan (24), presenta 
duplicaciones (25). El resto se debe a mutaciones 
de punto (26), y a inserciones e inversiones (27). 
La mayoria de las deleciones se agrupan 
alrededor de los exones 3-19 (20%) y 44-52 
(80%) (2, 19), regiones que podrian ester 
relacionadas con una alta frecuencia de 
recombined& intragenica ilegitima (28, 29), 
aunque varios elementos de insertion podrian 
contribuir a la inestabilidad del gen (30, 31). 
Los pacientes: 
Treinta y un pacientes varones referidos 
al Hospital Nacional de Niflos (HNN), 
diagnosticados inicialmente con distrofia 
muscular, cuyo cuadro clinico sugeria que podria 
tratarse de distrofinopatias, fueron reevaluados 
en el Servicio de Genetica y Metabolismo de este 
hospital. Veintitres mostraron sintomatologia 
propia de DMD y dos de BMD, mientras que seis 
no mostraron sintomas muy claros de alguna 
distrofinopatia. A estos pacientes se les tome una 
muestra de sangre para los estudios de ADN. 
Ademas se realize) un diagnOstico prenatal a una 
portadora obligada (dos hermanos suyos ya han 
muerto por cause de DMD y su hijo mayor 
tambien padece la enfermedad) proveniente de 
otro pais centroamericano. La muestra del 
product° en gestaciOn se obtuvo por punciOn 
'79 
umbilical, mientras que is senora trajo consigo 
sangre de su hijo mayor. En todos los casos se 
canto con el consentimiento informed° de los 
participantes o sus representantes legeles. 
Analisis molecular: 
Las muestras de sangre se obtuvieron 
con vacutainers provistos de EDTA come 
anticoagulante. Los ADNs se extrajeron, con el 
meted° de sal (36) y se analizaron en el Institute 
de lnvestigaciones en Salud (INISA) de la 
Universidad de Costa Rica. 
Mediante PCR-multiplex se amplificaron 
fragmentos de 28 exones y de 2 promotores, en 4 
reacciones independientes, a cada una de las 
muestras, Los perfiles de amplificacion son los de 
Chamberlain et al. (33, 34) y Beggs et al. (35). 
Con uno de los lotes de imprimadores se hizo 
necesario disminuir la temperatura de hibridacion 
de 60° a 57°. Otra variante introducida fue el use 
del buffer que acompana a la Taq-polimerasa en 
lugar del buffer de Chamberlain et al (33). 
Los productos de amplificacion se 
separaron par electroforesis en geles de 
poliacrilamida de 16 cm de longitud y 1.5 mm de 
espesor (3% gel empacador de 2 cm y 10% gel 
separador de 12 cm). El voltaje aplicado fue de 
120V constante durante 4-5 horas. Como 
amortiguador se emple6 TBE 1X. Los geles 
fueron teredos con nitrato de plata. La ausencia 
de bandas de amplificado se interprets coma 
evidencia 	 de 	 delecion 	 del 	 fragmento 
co rres pan diente. 
RESULTADOS 
En ninguno de los pacientes con 
diagnostic° clinico dudes° de distrofinopatia se 
observaron deleciones. Este resultado permite 
sugerir con mayor grade de confianza que ellos 
padecen de otro tipo de distrofia muscular, por lo 
que no se tomaron en cuenta en lo concerniente a 
lo que sabre las distrofinopatias permite concluir 
este trabajo. No obstante, se puede demostrar el 
valor agregado de una prueba molecular en el 
diagnostic° y en sus consecuencias en el 
tratamiento y en el consejo genetic°. 
El resumen de los principales criterios 
diagnosticos, el diagnostico y los resultados del 
estudio molecular de los pacientes considerados 
como distrofinopaticos se presentan en el Cuadro 
1. Dos pacientes, el 5 y el17 se consideraron 
afectados por BMD, mientras que los otros 23 
padecen de DMD. El tamizaje de deleciones se 
basa en Ia presencia o ausencia de los productos 
de amplificaciOn de las distintas regiones genicas 
probadas. La Figura 1 muestra un gel con los 
productos 	 de 	 amplificacion, 	 con 	 tres  
combinaciones de imprimadores, de un control 
normal y del paciente 6, quien tiene una delecion 
que abarca al menos seis exones (del 45 al 50)10 
que comprueba Ia sensibilidad y Ia especificidad 
del meted° empleado. 
De los 25 pacientes considerados 
distrofinopaticos, 10 presentaron deleciones. Seis 
mostraron deleciones que abarcan multiples 
exones: en el paciente 13 la delecion cubre al 
menos 23 exones, del 23 al 25; en dos pacientes 
abarca al menos ocho exones en el 17 del 45 al 
52 y en el 25 del 12 al 19; en el pacientel 1 siete 
exones, del 60 al 66; en los pacientes 6 y 24 seis 
exones (del 45 al 50 en ambos). En cuatro 
pacientes la delecion comprende un unico exon: 
en dos de ellos, el 2 y el 20 el exOn 52; en el 
paciente 8 el exem 19 y en el paciente 3 el ex6n 
44. Los otros 15 pacientes no presentaron 
deleciones. En vista de que los pacientes 18 y 19, 
asi como los 21, 22 y 23 son hermanos, podemos 
decir que solo el 45.5% (10 de 22) de las 
mutaciones estudiadas en esta muestra, contra 
66.7% esperado, son deleciones. No obstante, la 
mayor parte de ellas (90%) se encuentran en las 
2 regiones genicas de alta incidencia de 
deleciones, 30% alrededor de los exones 3-19 
(esperado 20%) y 60% en tome a la region de los 
exones 44-52 (esperado 80%) 
El diagnostic° prenatal practicado a 
solicitud de una portadora obligada, most() que 
el producto en gestation, un varon segen se 
determine par ultrasonido, no portaba ninguna 
delecion, mientras que el paciente indite de la 
familia, quien este muy afectado, segen 
referencia medica, tiene una enorme delecien que 
abarca al menos 37 exones, del 6 al 42. En una 
comunicacien con la senora, meses despues de 
que diera a luz, se informs que el nine Labia 
nacido bien y que su desarrollo era muy diferente 
en comparaciOn con el mostrado par su hermano 
mayor afectado a su misma edad. 
DISCUSION 
El conocimiento de Ia estructura y 
fund& de muchos de los genes responsables de 
enfermedades geneticas, gracias al desarrollo de 
la biologia molecular, ha permitido complementar 
y refiner el diagnOstico clinico, ya sea por el 
analisis directo del gen, a nivel de ADN, o par Ia 
evaluacien de sus productos genicos, si se' 
conocen. Asi, se puede determiner, con un grade 
de certeza haste hace poco insospechado, si 
alguno de ellos este involucrado en la patologia 
observada. 
La evolution del perfil de salud de Costa 
Rica muestra que, desde hace algunas decades, 
las enfermedades crOnicas han cobrado una 
80 
Cuadro 1: Indicadores y diagnostico clinicos y resultados del tamizaje de deleciones en el gen de la distroflna en 
pacientes diagnosticados con distrofinopatias en Costa Rica, 1998-2000. 
Edad Edad Historia 
Paciente examen inicio familiar MG' SH` SCK3 Diagnostic° Deleciones 
1 7 5 + + 24537 DMD no 
2 7 3 + + 16961 DMD 52 
3 14 2 + + 4674 DMD 44 
4 15 6 Miastenia + + >5000 DMD no 
Gravis 
5 9 5 - + 5519 WO no 
6 9 9 + + 15874 DMD 45-50 
7 9 7 + + 12562 DMD no 
8 12 8 + + 6385 DMD 19 
9 10 2 + 13505 DMD no 
10 12 3 NA" + 20000 DMD no 
11 3 2 DMD NA + 14680 DMD 60-66 
12 5 3 + + 4054 OMD no 
13 20 2 - + + 504 DMD 3-25 
14 12 3 - NA NA >10000 DMD no 
15 13 3 + + 1208 DMD no 
16 5 1 - + + 23000 DMD no 
17 12 3 + 2318 BMD 45-52 
18 19 7 DMD + + ND DMD no 
19 11 1 DMD + + 25860 DMD no 
20 15 <1 DMD NA NA >10000 DMD 52 
21 12 2 DMD - 36060 DMD no 
22 10 3 DMD + 18120 DMD no 
23 13 2 DMD + + 5445 DMD no 
24 16 2 - + - 916 DMD 45-50 
25 20 ND5 ND NA NA ND DMD 12-19 
Notas: Maniobra de Gowers, 2 seudohipertrofia, 3 creatina quinasa serica (U/I), 4 no aplica en MG y SH a edades avanzadas 
de examen con perdida de capacidad ambulatoria independiente, cuando hay hipotrofia y cuando tampoco hay referencia de 
si las hobo a edades tempranas, s no hay dato 
mayor importancia relative (37, 38) Sin duda el 
componente genetic° en la morbilidad de estos 
padecimientos es alto, por lo tanto es dare la 
necesidad de implementar metodos diagnosticos 
con base molecular En el caso concreto de las 
distrofias musculares, el diagnestico primario en 
Costa Rica es muy general y rara vez especifica 
el tipo de distrofias probablemente debido al 
traslape de sintomatologias observed° entre 
algunas de ellas, a la falta de apoyo al clinic() en 
pruebas de laboratorio que permitan el 
diagnostic° diferencial y a la deficiencia curricular 
en genetica medica de muchos medicos 
generales, neurologos y pediatras. 
Con este estudio, se ha iniciado en 
Costa Rica la aplicacien de este nuevo enfoque 
pare refiner el diagnostic° de las mas importantes 
de las distrofias musculares, las distrofinopatias. 
Para tener una idea de sus dimensiones en el 
pals, se puede intentar la siguiente estimacion. 
Entre 1981 y 2000 se informO de 811 834 
nactmtentos de varones (39). Si la tasa de 
incidencia pare DMD es de 1/3 500 nacidos vivos 
y la de BMD de 1/18 500, entonces en ese 
periodo debieron nacer 232 nitios con DMD y 44 
con BMD total con distrafinopatias 276. Se  
escogiO un periodo de 20 ems pues es lo 
maxim° que se espera que viva un paciente con 
DMD, asi, los nacidos antes de 1981 deben haber 
fallecido ya_ 
De los 25 pacientes analizados, 10 
presentaron deleciones. Esto tiene una 
consecuencia directa sobre el consejo genetico, 
ya que permite buscar is misma mutacion 
encontrada en el paciente indice en aquellas 
parientes con riesgo de ser portadoras, por 
ejemplo, madres, hermanas y tias maternas. La 
deteccion de portadoras es posible con tecnicas 
como la hibridacion fluorescente in situ (FISH) 
(40) y la cuantificaciOn de dosis genica en 
productos de PCR (41, 42, 43, 44). Si alguna de 
ellas es portadora, tendria una probabilidad del 
50% de que alguno de sus hijos varones fuera 
afectado. Par otra parte, si no lo fuera, tiene un 
riesgo muy bajo, el correspondiente a la mitad de 
la tasa de mutacion de este gen, que es el mismo 
de cualquier otra mujer de la poblacion. En 
ambos casos es claro el efecto de tal diagnOstico 
en sus decisiones sobre su futuro reproductivo, lo 
que sin duda traeria consigo un alivio emocional 
a muchas familias y al sistema de salud. 
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Figura 1: Electroforesis en gel de poliacrilamida (10%) mostrando productos de amplification de PCR-multiplex con 3 
combinaciones de irniarimadores (M M1, MM2 y MM3) en el gen de la distrofina y visualizados con nitrato de plata. 
Los carriles 1, 3, 5 y 7 corresponden a Ia muestra del paciente 6, mientras que los carriles 2, 4 y 6 son de un control 
normal. El carril 8 es del marcador de tamano de las bandas, las que se indican, en pares de bases, con nomeros a la 
derecha de algunas de ellas. Las flechas senalan is ausencia de bandas (falta de amplificaciOn) en las respectivas MM 
del paciente, bandas que si estan presentes en el control. Los nOmeros al lado de las bandas corresponden al 
numero del exon o promotor (Pm o Pb) amplificado. La ausencia de amplification se atribuye a la perdida (deletion) 
del segmento correspondiente en el gen. El paciente muestra falta de amplification de los exones 45 y 48 en el MM1 
(carril 1), de los exones 47 y 50 en el MM2 (carril 3) y de los exones 46 y 49 en el MM3 (carriles 5 y 7). Wiese que los 
exones 44 y 51 si amplificaron en la muestra del paciente (carril 1)10 que permits demarcar Ia extension de la 
deletion entre los exones 45 y 50. 
Otro pequeno ejercicio teOrico podria 
ayudar a estimar el impacto que tendrian las 
distrofinopatias sin medidas de prevenciOn 
apoyadas en un consejo genetic° based° en 
analisis moleculares. SegOn proyecciones del 
Observatorio Demografico del Programa 
Centroamericano de Poblacion, de la Universidad 
de Costa Rica (45), a finales del afio 2000 habria 
en Costa Rica 1 567 094 mujeres entre los 0 y los 
44 aflos de edad. Si la tasa de mutation (C) 
compensa a la tasa de elimination de alelos por 
muerte o incapacidad reproductive de los varones 
distrofinopaticos (coeficiente de selection a), sea 
= a (46 47), la proporciOn de portadoras seria:  
2pq para DMD, donde 
q= frecuencia de alelos produciendo DMD o 
1/3500 
y 
p = 1-q; 
mientras que 2p'q' para BMD, 
donde q' = 1/18500 
y 	 1-q'. 
De este manera, habria 896 portadoras 
de DMD y 172 de BMD (total 1068). Si cada 
mujer tiene en promedio 2.4 hijos, estas 
portadoras habran procreado al ario 2044, 
cuando se espera que las que ahora tiene 0 arias 
han concluido su ciclo reproductive, un total de 
82 
2563 descendientes, 641 de ellos varones 
afectados con distrofinopatias y un numero igual 
de hijas portadoras. Algunos de estos 
descendientes han nacido ya, por ejemplo, los 
hijos de is cohorte que tiene 45 afios ya nacieron, 
de hecho, los pacientes analizados aqui son de 
ese grupo y algunos de esos varones afectados 
ya murieron. Aparte del impacto emotional para 
las families con niiios distrofinopaticos, el costo 
de estos pacientes pare el sistema de salud serla 
muy eievado en vista del mayor numero de 
hospitalizaciones, de las estancias mas 
prolongadas y del mayor numero de 
intervenciones quirOrgicas que los pacientes con 
enfermedades geneticas requieren (48). 
En cuanto a los pacientes en quienes no 
se encontraron deleciones, no se puede concluir 
que no son distrofinopaticos, ya que la tecnica 
utilizada detecta unicamente deleciones. Debe 
recordarse que un tercio de las mutaciones 
responsables de las distrofinopatias son 
mutaciones de punto (49) y duplicaciones (25). 
Tales alteraciones, ocurren aleatoriamente a lo 
largo del gen, y dadas las dimensiones de este, 
no se ha podido desarrollar una estrategia 
racional de tamizaje molecular, por lo que no se 
puede avanzar mucho al respecto en asuntos de 
prevencion con la metodologia implementada 
para este estudics 
No obstante, con la implementation de 
este metodologia se puede iniciar el estudio de la 
epidemiologia de estas enfermedades en Costa 
Rica. Al momento, la proporcifin de pacientes con 
deleciones (10/22 45.5%) este por debajo de lo 
esperado (2/3 = 66.66%) segan investigaciones 
en otras pastes del mundo, pero la muestra no es 
suficiente para ser considerada valida, edemas 
de que representa, principalmente, una parte de 
la casuistica del Valle Central, la que es referida 
al Hospital Nacional de Ninos. El objetivo podria 
cumplirse con la colaboracion de la comunidad 
medica nacional, si se comunicaran, al Servicio 
de Genetica y Metabolismo del Hospital Nacional 
de Nines, los casos posibles candidatos a ser 
afectados con distrofinopatias. 
CONCLUSIONES 
El diagnostic° diferencial de las distintas 
distrofias musculares se ve dificultado por el 
traslape de sintomas y la falta de experiencia de 
los clinicos con enfermedades geneticas. Esto 
evidencia la necesidad de implementer metodos 
diagnosticos mas discriminantes en Costa Rica. 
El conocimiento de las causes proximales de 
muchas enfermedades geneticas permite 
implementer metodos diagnosticos a nivel del 
ADN. La utilidad de estos metodos se ha 
demostrado en este trabajo con el caso de las  
distrofinopatias. La identificaciOn de pacientes 
con deleciones permite edemas buscar estas 
mutaciones en las mujeres parientes del paciente 
que tendrian un riesgo mayor de ser portadoras 
de Ia mutation y asi ofrecerles consejo genetic° 
con mejor base. Aderres, Ia metodologfa podria 
servir para determiner la epidemiologia de estos 
padecimientos. 
AGRADECIM1ENTOS. 
A los senores Jorge Menge y a Victor 
Castillo por su ayuda tecnica y a los Dres. Kay 
Sanders Mengel por efectuar la toms de muestra 
de cordon umbilical y Mario Barrantes Gonzalez 
por referirnos a un paciente con DMD. Este 
trabajo fue financiado por la Vicerrectoria de 
Investigation de la Universidad de Costa Rica, 
proyecto numero 742-97-253. 
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ABSTRACT 
Objective: To introduce molecular-genetic 
methods to the study of dystrophinopathies in 
Costa Rica. 
Materials and methods: Thirty-one male patients 
diagnosed with muscular dystrophy, which could 
be affected with a dystrophinopathy, were 
clinically re-examined. Twenty-three had DMD, 
and two BMD and six showed no clear-cut 
symptoms of a dystrophinopathy. DNA samples 
were screened by multiplex PCR for deletions in 
the dystrophin gene. A prenatal diagnosis was 
made upon request from an obligate carrier. 
Results: Ten patients showed deletions: one has a 
deletion of 23 exons (3-25); two have deletions of 
eight exons (one 45-52, the other 12-19); another 
has a deletion of 7 exons (60-66); two have a 
deletion of 6 exons (both 45-50). The four 
remaining patients showed single-exon deletions: 
exon 52 (two patients), exon 19 and exon 44. The 
older son of the obligate carrier, affected with 
DMD, showed a deletion of 36 exons (6-42), 
whereas the fetus has no deletion. None of the 
patients with unclear diagnosis had deletions. 
Conclusion: The overlap of symptoms observed 
among different muscular dystrophies, the lack of 
available laboratory tests and the scarcity of 
physicians trained in Medical Genetics, evidence 
the need to implement more discriminatory 
diagnostic methods in Costa Rica. The 
identification of patients with deletions allows the 
search for the same mutations in women at risk of 
being carriers and to offer them a more accurate 
genetic counseling. 
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