Efecto de concentraciones enzimáticas y tiempos de digestión en el aislamiento de protoplastos a partir de callos y cultivos en suspensión de dos cultivares de naranja dulce (Citrus sinensis Osb.)

Abstract

A partir de callos embriogénicos y cultivos en suspensión de los cultivares de naranja dulce (Acosta 6 y Washington Navel), se evaluó el efecto de tres concentraciones enzimáticas y de diferentes tiempos de digestión sobre la obtención de protoplastos intactos. Se encontró que la concentración enzimática intermedia, que contena 1,0% celulasa, 0,2% pectoliasa y 1,0% macerozima, liber la mayor cantidad de protoplastos intactos. Los tiempos de digestin más efectivos variaron de acuerdo con el genotipo y el tipo de explante inoculado, entre cuatro y ocho horas de incubación en la solución enzimática de concentración intermedia. En Acosta 6, los cultivos en suspensión liberaron más protoplastos que los callos, pero en Washington Navelno se observó diferencia entre ellos. En forma general, se logró liberar mayor cantidad de protoplastos y células individuales a partir de Acosta 6 que de Washington Navel. Adicionalmente, se incluyen algunas características de la estructura de la célula como la cantidad obtenida de protoplastos intactos, as como, peso fresco y seco, el tamaño y la densidad en los materiales vegetales evaluados.

The effect of three enzyme concentrations and different digesting times over intact-protoplasts recovery from embryogenic callus and cell suspension cultures of sweet orange (Citrus sinensis Osb.) cultivars Acosta 6 and Washington Navel was evaluated. It was found, that the intermediate enzyme concentration (1.0% cellulose, 0.2% pectolyase and 1.0% macerozyme) produced the highest amount of intact protoplasts. The most effective digestion interval varied according to the genotype and the culture type, oscillating between four and eight hours in the already mentioned enzyme concentration. While the cell suspension cultures released more protoplasts than the callus cultures in cv. Acosta 6, no difference was found among culture types in Washington Navel. Generally, more protoplasts and individual cells were obtained from Acosta 6than from Washington Navel. Additionally, fresh and dry weight, as well as cell size and density were determined in the different culture types employed for isolation.